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羊棘球蚴（包虫）病ELISA抗体检测试剂盒
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羊棘球蚴(包虫)ELISA抗体检测试剂盒 IndirectELISAKitForEchinococcusGranulosus 使用说明书【简介】 试剂盒由抗原包被板、血清稀释板、酶标二抗及其它试剂制成，应用间接ELISA法检测羊血清中抗羊棘球蚴(包虫)主要保护性抗原Eg95蛋白的抗体。【用途】 适用于养殖场及检验机构对羊棘球蚴（包虫）病基因工程亚单位疫苗免疫效果的评价。【原理】 本试剂盒是采用棘球蚴主要保护性抗原EG95包被微孔板。在试验中，若待测血清样品中含有抗棘球蚴的特异性抗体，则将与检测板上抗原结合形成抗原—抗体复合物。之后加入的酶标二抗将与检测板上的抗原—抗体复合物发生特异性结合，再加入TMB底物溶液后形成蓝色产物。显色反应经终止液终止后呈黄色，最终通过测定450nm波长下吸光度即可得到结果。【试剂盒主要成分】 1 抗原包被板 2块 96孔/块2 阴性对照血清 1管 50μl /管3 阳性对照血清 1管 50μl /管4 酶标二抗 2管 0.2ml/管5 25倍浓缩洗涤液 1瓶 25ml/瓶6 底物溶液A 1瓶 10ml/瓶7 底物溶液B 1瓶 10ml/瓶8 终止液 1瓶 10ml/瓶9 样品稀释液 2瓶 30ml/瓶10血清稀释板 2块 96孔/块11说明书 1张 【样品制备】 取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。【试剂配制】 使用前，试剂盒内除酶标二抗外的各种试剂都应恢复到室温（25˚C左右）。25倍浓缩的洗涤液恢复至室温或略微加热后摇动使沉淀的盐溶解，然后用去离子水作25倍稀释，稀释好的洗涤液在2～8˚C可以存放7天。酶标二抗在使用前用样品稀释液按1:100倍稀释，现配现用。【样品稀释】 标准样品与待检样品均在血清稀释板中按1:50倍的体积稀释（推荐稀释方法：245µL样品稀释液中加5待检血清样品）。【操作步骤】 1、取抗原包被板，先加入50µL样品稀释液，再将稀释好的待检样品和对照样品各取50µL加入到抗原包被板孔中，用移液器轻轻吹打混匀。阴性对照和阳性对照各设2孔，置37˚C温育30分钟。2、甩掉板中的溶液，每孔加入稀释好的洗涤液200µL，静置1分钟倒掉，再在吸水纸上拍干，共洗3次。3、每孔加入稀释好的酶标二抗100µL，置37˚C温育30分钟。4、甩掉板中的溶液，每孔加入稀释好的洗涤液200µL，静置1分钟倒掉，再在吸水纸上拍干，共洗3次。5、每孔加入等体积混合好的底物溶液A与底物溶液B100µL，避光显色10分钟。6、每孔加终止液50µL，10分钟内测定450nm波长吸光度。【结果判定】 参考农业部关于印发《2013年国家动物疫病强制免疫计划》的通知，被检抗体正向间接血凝实验抗体效价≥25为阳性。根据该通知制定结果判定标准： 1实验结果同时满足下列条件，方为有效：标准阳性对照孔平均OD450nm≥0.6±0.02。标准阴性对照孔平均OD450nm≤0.3±0.02。2疫苗免疫后抗体水平检测结果的判定：样品OD450nm≤0.3，判为细粒棘球蚴(包虫)抗体阴性。样品OD450nm＞0.3，判为细粒棘球蚴(包虫)抗体阳性。样品OD450nm处于0.3±0.02临界值范围内，建议重复检测，以确保结果准确。3对细粒棘球蚴(包虫)免疫保护力检测结果的判定：样品OD450nm≤0.3，判为无保护力，所检样品对细粒棘球蚴(包虫)感染无保护力。样品OD450nm介于0.3与0.6之间，判为保护力低下，抗体水平较低，对细粒棘球蚴(包虫)感染有一定保护力。样品OD450nm≥0.6，判为有保护力，所检样品抗体水平较高，在攻毒试验中可提供高于90%的抵抗力。样品OD450nm处于0.3±0.02或者0.6±0.02两个临界值范围内，建议重复检测，以确保结果准确。 【注意事项】1 本底过高可导致结果整体水平偏高，实验过程需保证二抗清洗干净，或实验中添加空白对照。2 环境温度低于15˚C可导致结果整体水平偏低，实验过程需保证环境温度尽量接近25˚C，或适当延长底物液显色时间。3 底物液A和底物液B不要暴露于强光，避免接触氧化剂。 4 浓缩洗涤液用去离子水稀释，如果发现有结晶，应水浴加热使其溶解。5 酶标二抗应现配现用。6 4˚C过夜孵育样品及酶标二抗可以获得更好的结果。 【贮 存】 2～8˚C避光保存 【有效期】 9个月【生产企业】 重庆老版本彩名堂计划软件生物制品有限公司【地 址】 重庆市荣昌县昌元镇昌州大道东段板桥四支路3-03 【邮 编】 402460【技术服务】 023-85261707 【销售热线】 023-85261703（传真）
羊棘球蚴(包虫)ELISA抗体检测试剂盒 Indirect ELISA Kit For Echinococcus Granulosus
使用说明书
【简 介】
试剂盒由抗原包被板、血清稀释板、酶标二抗及其它试剂制成，应用间接ELISA法检测羊血清中抗羊棘球蚴(包虫)主要保护性抗原Eg95蛋白的抗体。
【用 途】
适用于养殖场及检验机构对羊棘球蚴（包虫）病基因工程亚单位疫苗免疫效果的评价。
【原 理】
本试剂盒是采用棘球蚴主要保护性抗原EG95包被微孔板。在试验中，若待测血清样品中含有抗棘球蚴的特异性抗体，则将与检测板上抗原结合形成抗原—抗体复合物。之后加入的酶标二抗将与检测板上的抗原—抗体复合物发生特异性结合，再加入TMB底物溶液后形成蓝色产物。显色反应经终止液终止后呈黄色，最终通过测定450nm波长下吸光度即可得到结果。
【试剂盒主要成分】
【样品制备】
取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。
【试剂配制】
使用前，试剂盒内除酶标二抗外的各种试剂都应恢复到室温（25˚C左右）。25倍浓缩的洗涤液恢复至室温或略微加热后摇动使沉淀的盐溶解，然后用去离子水作25倍稀释，稀释好的洗涤液在2～8˚C可以存放7天。酶标二抗在使用前用样品稀释液按1:100倍稀释，现配现用。
【样品稀释】
标准样品与待检样品均在血清稀释板中按1:50倍的体积稀释（推荐稀释方法：245µL样品稀释液中加5
待检血清样品）。
【操作步骤】
1、取抗原包被板，先加入50µL样品稀释液，再将稀释好的待检样品和对照样品各取50µL加入到抗原包被板孔中，用移液器轻轻吹打混匀。阴性对照和阳性对照各设2孔，置37˚C温育30分钟。
2、甩掉板中的溶液，每孔加入稀释好的洗涤液200µL，静置1分钟倒掉，再在吸水纸上拍干，共洗3次。
3、每孔加入稀释好的 酶标二抗100µL，置37˚C温育30分钟。
4、甩掉板中的溶液，每孔加入稀释好的洗涤液200µL，静置1分钟倒掉，再在吸水纸上拍干，共洗3次。
5、每孔加入等体积混合好的底物溶液A 与底物溶液B 100µL ，避光显色10分钟。
6、每孔加终止液50µL，10分钟内测定450nm波长吸光度。
【结果判定】
参考农业部关于印发《2013年国家动物疫病强制免疫计划》的通知，被检抗体正向间接血凝实验抗体效价≥25为阳性。根据该通知制定结果判定标准：
1 实验结果同时满足下列条件，方为有效：
标准阳性对照孔平均OD450nm≥0.6±0.02。
标准阴性对照孔平均OD450nm≤0.3±0.02。
2 疫苗免疫后抗体水平检测结果的判定：
样品OD450nm≤0.3，判为细粒棘球蚴(包虫)抗体阴性。
样品OD450nm＞0.3，判为细粒棘球蚴(包虫)抗体阳性。
样品OD450nm处于0.3±0.02临界值范围内，建议重复检测，以确保结果准确。
3 对细粒棘球蚴(包虫)免疫保护力检测结果的判定：
样品OD450nm≤0.3，判为无保护力，所检样品对细粒棘球蚴(包虫)感染无保护力。
样品OD450nm介于0.3与0.6之间，判为保护力低下，抗体水平较低，对细粒棘球蚴(包虫)感染有一定保护力。
样品OD450nm≥0.6，判为有保护力，所检样品抗体水平较高，在攻毒试验中可提供高于90%的抵抗力。
样品OD450nm处于0.3±0.02或者0.6±0.02两个临界值范围内，建议重复检测，以确保结果准确。
【注意事项】
1 本底过高可导致结果整体水平偏高，实验过程需保证二抗清洗干净，或实验中添加空白对照。
2 环境温度低于15˚C可导致结果整体水平偏低，实验过程需保证环境温度尽量接近25˚C，或适当延长底物液显色时间。
3 底物液A和底物液B不要暴露于强光，避免接触氧化剂。
4 浓缩洗涤液用去离子水稀释，如果发现有结晶，应水浴加热使其溶解。
5 酶标二抗应现配现用。
6 4˚C过夜孵育样品及酶标二抗可以获得更好的结果。
【贮 存】 2～8˚C避光保存
【有 效 期】 9个月
【生产企业】 重庆老版本彩名堂计划软件生物制品有限公司
【地 址】 重庆市荣昌县昌元镇昌州大道东段板桥四支路3-03
【邮 编】 402460
【技术服务】 023-85261707
【销售热线】 023-85261703（传真）